免疫球蛋白試劑盒復蘇操作流程: 1.準備工作,開水浴鍋,預(yù)熱試劑,超凈工作臺紫外照射30min,找到對應(yīng)細胞在液氮罐中的位置。
2.紫外照射后風機吹10min后,酒精擦拭臺面,放入試劑和離心管,取15ml離心管,加入9ml培養(yǎng)液。
3.在液氮罐中取出細胞,先擰松放液氮,再擰緊,將凍存管放入PE手套中,然后水浴融化后取出,1-2min。
4.將凍存管噴酒精后放入超凈臺內(nèi),擦干管壁,用1ml頭將細胞轉(zhuǎn)移到已加培養(yǎng)液的離心管中。
5.800-1000rpm離心5min,注意配平。
6.將離心好的細胞棄上清,加入5ml*培養(yǎng)基重懸,用移液管吹打8-10次,避免產(chǎn)生氣泡,將細胞懸液接種到10cm培養(yǎng)皿中,補加5ml培養(yǎng)液。
7.混勻,十字法或者8字法。將混好的細胞放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
免疫球蛋白試劑盒選擇和使用需要注意的問題:
1.試劑的選擇:選擇優(yōu)良試劑大家都是知道的,但是在檢測之前還應(yīng)該提前半個小時將試劑拿到常溫下進行解凍。
2.加樣中可能遇到的問題:在做血清或是血漿用于檢測試劑的時候,會碰到血清血漿不好分離的情況,這個時候的解決辦法是先放在常溫中1到2小時,然后在進行離心處理。
3.終止反應(yīng):在加終止劑的時候由于傾倒速度快,差生氣泡,造成假陽性結(jié)果。所以在倒終止劑的時候要緩慢倒。
4.顯色問題:使用了過期的顯色劑或者是顯色劑用過后放置時間太長,都有可能造成顯色劑不顯色。所以在進行顯色反應(yīng)的時候,要先查看顯色劑本身的情況。
5.洗板時容易造成誤差:因為洗板是人工洗的,所以判斷什么時候洗干凈了也是人為判斷的,這個時候帶有主觀色彩,所以多清洗幾次,還有就是在洗的時候孔與孔之間的液體容易交叉流動。
6.讀板:讀板的時候首先應(yīng)該保證板的清潔干凈。