小反芻獸疫病毒檢測試劑盒的制備工藝是一個復雜且精細的過程，涉及多個關(guān)鍵步驟和組件。
1.抗原制備
蛋白表達：將小反芻獸疫病毒（PPRV）的核蛋白基因序列進行全序列合成，并連接到質(zhì)粒上，如pet28a質(zhì)粒。然后，將連接后的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌中，如BL21菌株，并在含有抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)過夜。
蛋白提?。簭呐囵B(yǎng)好的細菌中提取重組蛋白，這通常涉及到細胞破碎、離心和純化等步驟。
2.酶標板準備
包被抗原：使用特定的緩沖液將小反芻獸疫N蛋白稀釋至適當濃度，然后包被到酶標板上。包被過程通常在低溫下進行，以確保抗原的穩(wěn)定性和活性。
封閉處理：為了減少非特異性結(jié)合，需要對包被后的酶標板進行封閉處理，通常使用含有BSA的磷酸鹽緩沖液。
3.其他試劑配置
樣品稀釋液：用于稀釋待檢樣本，以便在ELISA反應(yīng)中達到適當?shù)臐舛取?/span>
洗滌液：用于去除未結(jié)合的抗體或其他成分，以減少背景信號。
顯色液：包含TMB底物液，用于與酶標記物發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生可見的顏色變化。
終止液：用于終止ELISA反應(yīng)，通常是酸性溶液，如硫酸。
4.質(zhì)量控制
靈敏度測試：通過檢測不同濃度的標準品或已知陽性樣本來評估試劑盒的靈敏度。
特異性驗證：確保試劑盒只與目標抗原發(fā)生反應(yīng)，而不與其他非目標抗原交叉反應(yīng)。
重復性檢驗：通過多次重復實驗來驗證試劑盒的重復性和穩(wěn)定性。
